雞L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit
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操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后各管濃度分別是:320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,40 pg/ml,20pg/ml,0 pg/ml。
在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul(建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品、酶標(biāo)試劑及生物素標(biāo)記的抗IL-6抗體,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl,然后再加生物素標(biāo)記的抗IL-6抗體10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行
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