ELISA試劑盒提供免費(fèi)代測小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B）ELISA試劑盒
檢測范圍：具體詳見說明書
檢測種屬：人、大小鼠、豬、犬、羊、兔、牛、馬鈴薯等動(dòng)植物
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等
小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B） 價(jià)格：在線客服: :
小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B） Elisa實(shí)驗(yàn)原理：抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持它的免疫學(xué)活性；
小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B） 操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后各管濃度分別是：320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,40 pg/ml,20pg/ml,0 pg/ml。
在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul（建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品、酶標(biāo)試劑及生物素標(biāo)記的抗IL-6抗體，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl，然后再加生物素標(biāo)記的抗IL-6抗體10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行
小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。
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