商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
HotStart Bst4.2 大規(guī)格(125ml包裝酶) | 100萬(wàn)U | A-PJ1007 |
產(chǎn)品介紹:
Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 經(jīng)酶電子重構(gòu)架和進(jìn)化篩選(in silico Design & invitro Evolution),其為Bst4.0 的升級(jí)品,通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或RT-LAMP 擴(kuò)增。
性能提升包括 :
(1 )Bst 4.2 全系包含 熱啟動(dòng)Aptamer,該配體確保酶在<30℃時(shí),酶活封閉效率>95%,在>60℃時(shí) 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增;
(2)反應(yīng)溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高擴(kuò)增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;
(3)全系包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增,并使得擴(kuò)增均一性大幅提升。
注意: HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(8U/μl)不含有甘油,可用于凍干體系的建立。
儲(chǔ)存:長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃以下(12 個(gè)月有效);制品反復(fù)凍融 10 次不影響性能,但應(yīng)避免反復(fù)凍融;制品由于含有高濃度的糖組分,-20℃保存的酶制品,在融化時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶物,此時(shí)在 30℃的溫度下融化,過高的溫度可能會(huì)導(dǎo)致熱啟動(dòng)性能下降。一經(jīng)融化推薦置于 2-8℃保存,在此條件下制品穩(wěn)定儲(chǔ)存 6 個(gè)月。
特殊說(shuō)明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃,最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此其可替代 的 Bst4.0 系列,用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP的擴(kuò)增。
(2) 由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為 70℃,因此在進(jìn)行eLAMP 擴(kuò)增時(shí),反應(yīng)溫度為 70℃。
1. 標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增
1.1 10xLAMP Primer Mix:FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4
μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 配制 LAMP 反應(yīng)體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture(10 mM each) 3 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
1.3 反應(yīng)體系配好后,置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min。
2. eLAMP 擴(kuò)增
2.1 10xeLAMP Primer Mix : FIP/BIP=8 μM each;
LF/LB=4 μM each。
注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,為 Bst4.2 系列專用的使用策略,對(duì)于大多數(shù)引物組,在Helicaser 的加持下,擴(kuò)增速度幾乎不受影響。如引物擴(kuò)增效率低,可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16uM。
2.2 配制 eLAMP 反應(yīng)體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture(10 mM each) 3 μl
10xeLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
2.3 eLAMP 的擴(kuò)增溫度為 70°C,反應(yīng) 20~30min。
其它注意事項(xiàng)
(1) 制品中包含高濃度的鹽組分,使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù),防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接觸或吸入,請(qǐng)用大量的清水沖洗。
(2) 防止氣溶膠污染,盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。
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