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試驗原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
二、產(chǎn)品性能:
1)物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣。
2) 劑量反應(yīng)曲線線性
標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.99。
3) 精密度
批內(nèi)精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于8%。
批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于12%。
4) 特異性
本試劑盒識別天然和重組人白細(xì)胞介素6(IL-6)。
5) 穩(wěn)定性
注意事項
2℃-8℃保存,有效期6個月。
三、樣本收集:
細(xì)胞培養(yǎng)上清
2000 × g條件下離心20m分鐘,去除細(xì)胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
血清樣本
離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后,2000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測,或者分裝,-20℃以下貯存,避免反復(fù)凍融。
血漿樣本
EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。2000 × g 離心 20 分鐘收集樣本。即刻檢測, 或者分裝,-20℃以下貯存,避免反復(fù)凍融。
組織樣本
用預(yù)冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(般按1: 9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9 mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推 jian在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進步裂解組織細(xì)胞,可以對勻 漿液進行超聲破碎或反復(fù)凍融。后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘,取上清檢測。
細(xì)胞提取液樣本
貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞;懸浮 細(xì) 胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸并通過反 復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘,取上清檢測。
注意:1)避免樣本的反復(fù)凍融,在檢測,冷凍樣本應(yīng)緩慢地恢復(fù)至室溫,輕柔混勻。 2)本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本,但是未充分驗證。
四、產(chǎn)品功能:
1) 試劑、樣本平衡:檢測之請將所有的試劑、樣本平衡至室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議
做復(fù)孔。
配置工作液:按面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
2) 加標(biāo)準(zhǔn)品、樣本:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,
樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
3) 加 HRP標(biāo)記抗體:除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體
100μL。
4) 孵育:使用封板膜封板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
5) 洗滌:棄掉液體,每孔加入300μL洗液洗板,靜置20s,洗滌5次。每次洗板,在吸水紙上拍 干。為獲得理想的實驗性能,必須*移除殘留液體。
6) 加底物顯色:每孔加入50μL顯色底物A、B 各50μL,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。
7) 加終止液:每孔加入50μL終止液。顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化 明顯不均勻,請輕輕叩擊板框,充分混勻。
8) 檢測讀數(shù):在 15分鐘之內(nèi),使用450nm酶標(biāo)儀進行檢測讀數(shù)。
常用型號五、試劑組成:
未開封試劑盒 | 貯存于 2 - 8℃。 請在有效期內(nèi)使用。 | |
打開的 |
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試劑盒或重組試劑 | 顯色底物A 顯色底物B |
在 2 - 8℃, 大約可以貯存 3個月。 |
| 終止液 |
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| 20×洗液 |
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| 樣本稀釋液 |
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| 標(biāo)準(zhǔn)品 |
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| HRP 標(biāo)記抗體 | 在 2 - 8℃,大約可貯存 14天。使用后丟棄。 |
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| 未使用的板條請放回鋁箔袋,封好封 |
| 預(yù)包被酶標(biāo)板 | 口。在 2 - 8℃,大約可貯存 1 4天。 |
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