腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
以下是腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書的相關產(chǎn)品：

醋酸麥迪霉素 英文名稱：Maddie of lincomycin acetic acid 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

交沙霉素 英文名稱：Josamycin propionate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

萬古霉素 英文名稱：Vancomycin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

交沙霉素 英文名稱：Josamycin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

吉它霉素 英文名稱：Kitasamycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

克拉霉素 英文名稱：Clarithromycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

奈替米星 英文名稱：Netilmicin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

大觀霉素 英文名稱：Spectinomycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

西梭米星 英文名稱：Sisomicin 規(guī)格：：150mg 保存：：-20℃，避光

羅紅霉素 英文名稱：Roxithromycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

磷霉素 英文名稱：Fosfomycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

核糖霉素 英文名稱：Ribostamycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

乙酰螺旋霉素 英文名稱：Acetyl spiramycin 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

磺芐西林 英文名稱：Sulbenicillin 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

腺病毒通用PCR檢測試劑盒說明書Brome Mosaic Virus(BMV)雀麥草花葉病毒RT-PCR試劑盒

Brome Streak Mosaic Virus(BStMV)雀麥草條紋花葉病毒RT-PCR試劑盒

Burkholderia caryophylli香石竹細菌性萎蔫病菌PCR試劑盒

Burkholderia gladioli pv. alliicola洋蔥腐爛病菌PCR試劑盒

Burkholderia glumae水稻細菌性谷枯病菌PCR試劑盒

Bursaphelenchus cocophilus椰子紅環(huán)腐線蟲PCR試劑盒

Bursaphelenchus xylophilus松材線蟲PCR試劑盒PCR試劑盒

Cacao Swollen Shoot Virus(CSSV)可可腫枝病毒PCR試劑盒

Calibrachoa Mottle Virus(CbMV)小花矮牽牛斑點病毒PCR試劑盒

Candidatus Liberibacter asiaticus柑橘黃龍病菌亞洲種LAMP試劑盒

Candidatus Liberibacter asiaticus柑橘黃龍病菌亞洲種PCR試劑盒

Candidatus Liberibacter asiaticus柑橘黃龍病菌亞洲種染料法熒光定量PCR試劑盒

Candidatus Liberibacter asiaticus柑橘黃龍病菌亞洲種探針法熒光定量PCR試劑盒