表沒食子兒茶素沒食子酸酯
標(biāo)本的采集及保存
1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：
臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
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樣品測(cè)定
1． 移取xx微升 去干擾液（Reagent C）到上述待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)樣品管里，混勻
2． 加入xx微升 反應(yīng)液（Reagent D）
3． 加入xx微升 顯色液（Reagent E），混勻
4． 室溫下孵育20分鐘
5． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心3分鐘，速度為5000g
6． 移取1毫升上清液到比色皿
7． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，獲得待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品讀數(shù)
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常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用廣泛的一種。
GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高，表達(dá)產(chǎn)物純化方便，利于GST抗體制備的特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè)，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測(cè)GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測(cè)和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)，以及純化、定性或定量檢測(cè)GFP融合表達(dá)蛋白等。
Myc標(biāo)簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)但很少用于純化。
HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運(yùn)用。
MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。
其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應(yīng)用相對(duì)較少。
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