馬血清
胎牛血清,小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別:
這三種血清的成份,總體沒有什么明顯差別,只是有一些成分與其生存環(huán)境有關(guān),如上述有人說的抗體等很少。此外,因生長發(fā)育的需要,有些成分在小牛出生后會(huì)發(fā)生一些變化。不過還沒有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點(diǎn)可以肯定,胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。
胎牛本身生活在一個(gè)潔凈環(huán)境當(dāng)中,其血清與外界隔絕,只要生產(chǎn)工藝科學(xué)規(guī)范,其質(zhì)量肯定要新生牛和小牛要好。
血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展,但仍存在一些問題。
胎牛血清是品質(zhì)高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。
馬血清
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?
來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37
℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
馬血清
操作步驟
試管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊紅細(xì)胞: 2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清:待測血清 0.2ml,加應(yīng)用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管:全溶血管:2%綿羊紅細(xì)胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對(duì)照:補(bǔ)體 CH50 測定試管法
5、結(jié)果測定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對(duì)照管應(yīng)不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管,再用分光光度計(jì)測(波長 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點(diǎn)管,然后按下公式計(jì)算 CH50 值:
血清補(bǔ)體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。
如第 5 管為終點(diǎn)管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。
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